NovaBlue(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86087-01(10×100ul)/BFNC86087-02(50×100ul)

NovaBlue(DE3)：                                        100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^`[ proA⁺B⁺ lacI^q ZΔM15::Tn10 (Tet^R)] endA1 hsdR17(r_k12^-,m_k12⁺) supE44 thi -1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

產(chǎn)品說(shuō)明

NovaBlue(DE3)來(lái)源于K12菌株，具有*的轉(zhuǎn)化效率，是轉(zhuǎn)化效率較高的原核表達(dá)菌株，可同時(shí)用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建和蛋白的原核表達(dá)。NovaBlue(DE3)菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū)，使得NovaBlue(DE3)菌株可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，廣泛用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。NovaBlue(DE3)菌株具有四環(huán)素抗性，endA1和recA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提??；lacZΔM15的存在使NovaBlue(DE3)可用于藍(lán)、白斑篩選。

青旗生物生產(chǎn)的NovaBlue(DE3)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁹cfu/μg DNA。

操作方法

1. NovaBlue(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上（若質(zhì)粒濃度較高，也可稀釋后涂板，務(wù)必保證能在平板上挑到單克隆菌落）。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

NovaBlue(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

IPTG配制：

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。